液相色谱仪U3000-搭配多检测器（VWD-FLD-RID）性能测试

Thermo Scientific™ UltiMate™ 3000 标准四元系统具有流动相灵活性的特点。具有可调节的梯度延迟体积，支持四溶剂梯度，流速稳定性极佳，是检测技术的独特选择，标准四元系统非常适用于为增加灵活性，可接受中等速度梯度反应的情况，例如多溶剂，长时间柱清洗，三元或四元梯度或高通量常规环境以及苛刻研发实验室的方法开发。

性能规格

产品概述

建议用途

适用于需要 HPLC 或入门水平 UHPLC 兼容系统的实验室。具有集成到泵模块中的 4 通道溶剂脱气装置，推荐将四元泵用于使用了传统 3-5 µm 粒径色谱柱或较短 UHPLC、亚 2 µm 粒径色谱柱的方法中。典型使用领域为制药产业的 QA/QC、食品和饮料或者个人护理用品，但也包括环境方法和学术研究。

标准四元系统是四元 RS（快速分离）系统的替代品，被认为反压更高并在设计上具有相同的系统延迟体积。

选择适合您应用的配置

1、四溶剂通道泵设计，一次最多有 4 种溶剂，整合了四通道脱气机（LPG-3400SD）

2、用于具备恒温或非恒温自动进样器 (WPS-3000TSL/WPS-3000SL) 的六个 1 升溶剂瓶或大流动相储液箱 (SR-3000) 的宽溶剂架

3、恒温柱温箱，具有多达两个可现场升级的柱交换阀（TCC-3000SD）

4、二极管阵列(DAD)、可变波长(VWD)、荧光(FLD)、电喷雾(CAD)、示差(RID)或质谱(MS)检测器

5、馏分收集器 (AFC-3000)

6、Chromeleon 7.2 软件包（联网、单机、远程数据处理和/或控制）

U3000四元低压梯度泵

该泵有 4 个通道，分别为 A、B、C、D，

最大耐受压力为 620bar；  

溶液流动路径：溶剂瓶→真空脱气机，脱气→比例阀→泵头下方入口单向阀→

平衡泵头→泵头上方出口单向阀→U 型管→工作泵头→毛细管混合器→静态混合器→六通阀

U3000自动进样器

流动相溶液流动路线：（1）load（装样）状态：六通阀“5”→“4”，流动相 不经过针，直接流到下面色谱柱；（2）inject（进样）状态：六通阀“5”→“6”， 吸样后进样针回到 needle port，流动相经过样品环→进样针→六通阀“3”→“4”， 流到下面色谱柱。

在清洗注射器、缓冲环、针外壁时，在软件上按从下往上的顺序清洗，使仪器 最终在 inject 状态下平衡，在该状态下溶液才会通过进样针，可以避免第一针不出峰的情况。

注意事项：

（1）注射器中有气泡无法排出时，需更换注射器。清洗注射器的操作：将注

射器拆下，把注射器头部放入异丙醇中，以快推慢拉的方式抽取异丙醇 3~5 次。

（2）进样针堵塞时，将进样针拆下，清洗；进样针漏液需更换进样针。

（3）注射器下方凹槽处不能放任何东西。

U3000柱温箱

（1）连接色谱柱的viper 管最好要与进口的柱子相连，否则可能会因柱子螺

纹与 viper 管不符而导致损坏色谱柱。

（2）在拆下色谱柱时，应水平拔出，不能左右晃动，避免色谱柱塌陷而影响

分离效果。如果色谱柱水平拔不出来，可以采用以下两种方式：①将柱温箱温度调到 10℃，维持 5min，利用物体遇冷收缩的原理，可将色谱柱拔出；②利用反冲的方式，若色谱柱入口拔不出来（先旋松再进行反冲），将出口用死堵头堵住，开泵，当流速达到 100bar 之后，尽快把色谱柱入口拔出。若色谱柱出口拔不出来，在检测器入口处的 viper 管接一个双通，用死堵头堵住，之后操作同上。

（3）C18 柱耐受的 pH 为 2~8。

VWD检测器

VWD检测器是基于溶质分子吸收紫外光的原理设计的检测器，其工作原理是Lambert-Beer定律，即当一束单色光透过流动池时，若流动相不吸收光，则吸收度A与吸光组分的浓度C和流动池的光径长度L成正比。

优点

紫外吸收检测器不仅灵敏度高、噪音低、线性范围宽、有较好的选择性，而且对环境温度、流动相组成变化和流速波动不太敏感，因此既可用于等度洗脱，也可用于梯度洗脱。紫外检测器对流速和温度均不敏感，可于制备色谱。由于灵敏高，因此即使是那些光吸收小、消光系数低的物质也可用UV检测器进行微量分析。

用途

VWD检测器使用于大部分常见具有紫外吸收有机物质和部分无机物质。紫外检测器对占物质总数约80%的有紫外吸收的物质均可检测，既可测190-350nm范围的光吸收变化，也可向可见光范围350-700nm 延伸。

VWD检测器适用于有机分子具紫外或可见光吸收基团，有较强的紫外或可见光吸收能力的物质检测。一般当物质在200-400nm有紫外吸收时，考虑用紫外检测器。

VWD测萘的线性和重复性

仪器方法

运行时间：6 min

流速：1 ml/min  甲醇/水=8：2

色谱柱：Hypersil GOLD^TM  250×4.6 mm

柱温箱温度：40 ℃

检测器波长：220 nm

结论：

萘标采用外标法定量，结果表面在0.1-10ppm内线性良好，相关系数≥0.99。

结论：

通过对同一瓶萘标连续测试十次，实验结果表面，萘的峰面积相对标准偏差为1.17%

荧光检测器

荧光检测器（FLD)是光学检测器。在荧光检测器中，样品暴露于所定义波长的光中（激发）。因此，激发的样品物质在较高波长处发出光（发射）。将光电倍增管定位为与光源成 90° 角，并检测荧光物质发出的光。与 UV/Vis 检测器相比，荧光检测器测量的是极弱的光信号，而不是测量光强度差值（吸光度）。

荧光检测器是一种设计用于 HPLC 分析的高质量仪器，作为 UltiMate 3000 系统的一部分。该模块专为 HPLC 和 UHPLC 分析而开发，可以在多种实验室环境中用于执行常规分析和精细的 HPLC 研究任务：

● 氙气闪光灯用于激发 200 nm 至 880 nm 的波长范围。

● 使用独特的 Dual-PMT 选件，可以将波长范围扩展到近红外光谱区域（最高 900 nm），并且 UV/VIS 光谱区域的灵敏度不会有任何损失。

● 在单通道模式下，数据采集频率高达 100 Hz (FLD-3100) 或 200 Hz（FLD-

3400RS，在 Chromeleon 7 下），使得可通过 UHPLC 快速分离。波长切换时间小于 250 ms。

● 对检测器进行了优化，以在灯的整个使用寿命期间获得更高的灵敏度（水的拉曼光谱信噪比高于 550）。因此，甚至可以检测到最小的峰。

● 流通池配备主动温度控件，可确保在环境温度波动时改善重现性。

● 为了抑制光栅光谱仪中常见的高阶辐射和光散射，该检测器配备光学滤光片。用户可以选择通过 FLD-3400RS 检测器的滤光片抑制的波长范围。

● FLD-3400RS 可以使用单独的参数（波长、灵敏度、滤光轮）同时最多测量四个通道（2D 数据）。

● 检测器可通过 Chromeleon 色谱管理系统进行控制。由于 Chromeleon 的全面的数据分析和评估功能，因此这可以提供高度的系统集成和最高的分析效率。

● 为优化系统性能和可靠性提供了各种安全和监控功能。

● 可能暴露于溶剂的所有部件均采用对于 HPLC 中最常用的溶剂和缓冲溶液具有最佳耐受性的材料制成。

FLD测萘的线性和重复性

仪器方法

运行时间：6 min

流速：1 ml/min  甲醇/水=8：2

色谱柱：Hypersil GOLD^TM  250×4.6 mm

柱温箱温度：40 ℃

激发波长：254 nm  发射波长：340 nm  流通池温度：46 ℃

结论：

萘标采用外标法定量，结果表面在1-200ppb内线性良好，相关系数≥0.99。

结论：

通过对同一瓶萘标连续测试十次，实验结果表面，萘的峰面积相对标准偏差为0.97%

示差折光检测器（RID）

对于偏转式示差折光检测器，光路在通过两个装有不同液体的检测池时发生偏转，偏转的大小与两种液体之间折光率的差异成比例。光路的偏转由光敏 元件上的位移测得，显示了折光率的不同。示差折光检测器在光学系统中采用了多种精密装置，提高了运行的稳定性，也使检测器结构更加紧凑。

RID测蔗糖的线性和重复性

仪器方法

运行时间：1 min

流速：1 ml/min  甲醇 100%

色谱柱：无

柱温箱温度：40 ℃

检测器：正极，流通池温度40 ℃

结论：

蔗糖采用外标法定量，结果表面在1000-10000ppm内线性良好，相关系数≥0.99。

结论：

通过对同一瓶样品连续测试六次，实验结果表面，蔗糖的峰面积相对标准偏差为0.09%

总结，该套U3000液相可实现多种检测器搭配，满足不同的应用需求，各检测器的稳定性优异，VWD测萘的峰面积相对标准偏差为1.17%，FLD测萘的峰面积相对标准偏差为0.97%，RID测蔗糖的峰面积相对标准偏差为0.09%。完全满足广大实验室对于定量稳定性的需求。