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液相色谱_东莞-完善药物提取的纯化方法
发表时间:2021/3/26 17:41:28  |  点击率:9370

制备液相色谱以其高分离效率,重现性和低溶剂消耗而闻名,是一种纯化技术。来自中国的色谱专家团队应用了传质动力学建模和吸附等温线,以改善该技术的缺点之一,即超载导致的非线性,这是纯化工艺发展的重要问题。

1中国西南医科大学的一组研究人员选择了羟基酪醇与橄榄果和叶片中橄榄苦苷水解产生的其他成分同时生成的纯化方法:

使用液相色谱岛津LC-2030系列仪器进行HPLC分析,该仪器配备有脱气器,低压梯度仪,混合器,自动进样器和柱箱,并与UV检测器相连。在配备P680A泵,低压梯度仪,带有500μL样品定量环的手动进样器,TCC 100柱温箱和PDA 100检测器的Dionex P680A系列仪器上进行馏分收集。色谱条件为5%甲醇或乙醇水溶液。进样量5μL;柱温40°C;检测波长为280 nm。使用三根色谱柱(C8TDE,C18ME和C18TDE)在0.1至1.5 mL/min的15种不同流速下以0.1 mL/min的增量比较羟基酪醇的传质动力学。

为了精确确定变量对等效于理论塔板(HETP)的高度的影响,使用van Deemter方程,Gidddings方程,Horvath和Lin方程以及Knox方程计算了羟基酪醇的传质动力学。 van Deemter方程的三个项,即涡流扩散(A项;由于固定相色谱柱的存在而导致的峰展宽,与流动相的速度无关),分子扩散(B项)和传质阻力(C项) ),确定了三列中的两种有机改性剂。随后研究了吸附等温线,以探讨溶质在固定相和流动相之间处于平衡状态的分布。将浓度较高的羟基酪醇(10–160mmol/L)的标准溶液泵入C18TDE色谱柱,并记录穿透时间。

在这项工作中,发现在5%甲醇-水条件下C8TDE和C18ME色谱柱的最佳线速度为6.37 mm/s(0.3 mL/min),在5%乙醇条件下为4.24 mm/s(0.2 mL/min)。以水为流动相。对于C18TDE色谱柱,发现5%甲醇-水的最佳线速度为14.85 mm/s(0.7 mL/min),而5%乙醇-水的最佳线速度为4.24 mm/s(0.2 mL/min)。发现C18TDE柱是最高效的色谱柱,传质动力学分析表明,乙醇是分离羟基酪醇的合适溶剂,因为带有甲醇流动相的B项极其敏感,因此在改变其他条件时很难稳定其性能。由于C18TDE的最小A项以及可接受的B和C值,因此它是最佳选择。因此,选择C18TDE和乙醇纯化羟基酪醇是因为这种组合对变化不敏感,具有最佳的A,B和C项,并且符合Langmuir等温线模型。羟基酪醇已成功纯化,样品量为1.6%,回收率为90.98%,纯度为98.01%,以5%乙醇-水为流动相,采用了优化的分馏方法,流速为0.2 mL/min。

2中国林业科学研究院,林产化学研究所等用油橄榄叶橄榄苦苷酶解制备羟基酪醇的研究:

使用岛津LC-20AT-DAD高效液相系统,岛津UV-1800紫外可见分光光度计,ZWY-1 10X30型水浴摇床,PHS-3C型pH计,H1650高速台式离心机,SHB-3型循环水多用真空泵,KQ5200DE数控超声波清洗器。

以1 g油橄榄叶提取物为原料,采用高效液相色谱法测定油橄榄叶橄榄苦苷(OE)和羟基酪醇(HT)的含量,筛选得到适合用于OE酶解制备HT的酶,通过单因素和正交试验优化酶解工艺,并考察了HT、OE和油橄榄叶提取物清除二苯基苦基肼(DPPH)自由基的抗氧化活性。结果表明,在相同酶活力条件下,半纤维素酶对OE的降解和HT的制备都有着很好的效果,其次为纤维素酶和β-葡萄糖苷酶。半纤维素酶降解OE的最佳工艺为温度60℃、p H值5.5、酶量40 mg、时间6 h,得到HT质量分数为6.07%,OE降解率为85.28%。酸解、碱解和酶解方法的比较结果表明,盐酸水解后HT质量分数可达7.41%,效果略优于酶水解;但Na OH水解后HT质量分数仅为4.09%。DPPH自由基清除实验结果表明,DPPH自由基清除能力为HT>维生素C>OE>2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚>油橄榄叶提取物,HT的半数抑制质量浓度(IC50)值可达1.07 mg/L。

液相色谱对于药物提取,纯化仍然是一个巨大的挑战,因为结构相似的化合物可以共存于基质中,特别是对于从生物发酵或多肽合成中获得的药物而言。

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