液相色谱HPLC是一类分离与分析技术，其特点是以液体作为流动相，利用混合物在液-固或不互溶的两种液体之间分配比的差异,对混合物进行先分离,而后分析鉴定的仪器。液相色谱HPLC广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。

1 维护液相色谱柱

①建议检测前样品和流动相进行过滤。
②建议每天做完样品后及时进行清洗。
③常规检测，测试完后直接把色谱柱反向连接采用90%有机相冲洗45min，最后保存在纯甲醇或纯乙腈中。
④使用缓冲盐条件：
*等度条件：使用缓冲盐之前和之后都用过渡流动相以1ml/min流速冲洗45min。
*梯度条件：使用缓冲盐之前与初始流动相组成相同的过渡流动相以1ml/min流速冲洗45min。
注意：过渡流动相是指有机相和水相比例与分析流动相相同比例，只是不含有缓冲盐。
*缓冲盐冲洗干净后，采用90%有机相反向冲洗60min，最后保存在纯有机溶剂中。
注意：如果使用缓冲液不能存留色谱柱中过夜。

2 氨基柱使用一段时间后，柱效降低，峰形改变的恢复方法

用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗该柱(冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨)，之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1％。

3 液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因：

①筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。
②存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子。
③可能柱超载，减少进样量。

4 HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法

①样品量不足，解决办法为增加样品量。
②样品未从柱子中流出，可根据样品的化学性质改变流动相或柱子。
③样品与检测器不匹配，根据样品化学性质调整波长或改换检测器。
④检测器衰减太多，调整衰减即可。
⑤检测器时间常数太大，解决办法为降低时间参数。
⑥检测器池窗污染，解决办法为清洗池窗。
⑦检测池中有气泡，解决办法为排气。
⑧记录仪测压范围不当，调整电压范围即可。
⑨流动相流量不合适，调整流速即可。
⑩检测器与记录仪超出校正曲线，解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。

5 做HPLC分析时，柱压不稳定，找出原因并解决

①泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理。
②比例阀失效，更换比例阀即可。
③泵密封垫损坏，更换密封垫即可。
④溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法。
⑤系统检漏，找出漏点，密封即可。
⑥梯度洗脱，这时压力波动是正常的。

6 HPLC柱验收测试时柱压过高是用户常碰到的问题。

柱压过高是HPLC柱用户常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题。
①拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查。
②把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查。
③将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。这时，如果柱压仍不下降，再检查。只用于使用过的柱子。
④更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高，请与厂商联系。一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题。

7 出现峰展宽的原因

①样品体积过大：用流动相配样，总的样品体积小于第一峰的15%。
②在进样阀中造成峰扩展:进样前后排出气泡以降低扩散。
③数据系统采样速率太慢:设定速率应是每峰大于10点。
④流动相粘度过高:增加柱温，采用低粘度流动相。
⑤检测池体积过大:用小体积池，卸下热交换器。
⑥保留时间过长:等度洗脱时增加强溶剂含量，也可用梯度洗脱。
⑦柱外体积过大:将连接管径和连接管长度降至最小。
⑧样品过载:进小浓度小体积样品。

8 避免流动相出现气泡

①流动相溶液中往往因溶解有氧气或空气而形成气泡。
②液路阻力比较大，吸液时出现了真空气泡。
③系统开始工作时未能将流路中的空气排除干净。
④在注入样品时混入了空气。

9 常用的实验室脱气方式

①加热回流脱气，脱气效果最佳，但无法保持。
②氦脱气，此方法脱气效果佳，能除去百分之九十以上的空气，但氦气价格太贵，所以用的不多。
③真空脱气，效果仅次于氦脱气，但脱气过程中容易造成样品溶液挥发损失。
④超声脱气，只能脱去约百分之三十的空气，但在实验室中最常用。目前还是尽量争取用在线脱气，方便且效果好。