二手高效液相色谱的分析

二手高效液相色谱法和其它分析方法相比具有很高的分辨率，为了达到zui佳的分离效果可以选择流动相和固定相:同时它的分析速度很快，一般只需要几分钟或者即使分钟;它还具有很高的重复性，使用样品还可以回收;它使用的色谱柱还可以重复使用，非常环保;具较高的自动化程度，在进行分析时，分析的精确度也很高。所以高液相色谱法被广泛应用，尤其是对大部分的有机化合物进行分离和分析，在分离和分析高沸点、极性强、大分子、热稳定差的化合物时有很大的优势。

由于分离机制不同，二手高效液相色谱法可分为以下几类：

一、吸附色谱法

以吸附剂为固定相的色谱方法称为吸附色谱法。使用zui多的吸附色谱固定相是硅胶，流动相一般使用一种种或多种有机溶剂的混合溶剂。在吸附色谱中,不同的组分因和固定相吸附力的不同而被分离。组分的极性越大、固定相的吸附力越强，则保留时间越长。流动相的极性越大，洗脱力越强，则组分的保留时间越短。

二、液-液分配色谱法
液-液分配色谱的固定相和流动相是互不相溶的两种溶剂，分离时，组分溶入两相，不同的组分因分配系数(K)的不同而被分离。目前广泛使用的化学键合固定相是将固定液的官能团键合在载体上而制成的，使用化学键合固定相的色谱方法(简称键合相色谱法)可以用分配色谱的原理加以解释。键合相色谱法在HPLC中占有极其重要的地位，是应用zui广的色谱法。

三、离子交换色谱法
离子对交换色谱法是以离子交换剂为固定相的色谱方法，组分因和离子交换剂亲和力的不同而被分离。柱填料含有极性可离子化的基团，如羧酸、磺酸或季铵离子，在合适的PH值下，这些基团将解离，吸引相反电荷的物质。由于离子型物质能与柱填料反应，所以可被分离。样品中不同的组分因离子交换平衡常数的不同而分离o离子交换色谱的流动相一般为一定PH值的缓冲溶液，有时也加入少里的有机溶剂，如乙醇、四氢呋喃、乙腈等，以增大组分在流动相中的溶解度。流动相的PH值影响离子交换剂的交换容里。对弱酸或弱碱性的被分离组分，流动相的PH值还会影响其电离状况，流动相的PH值必须使待分离组分处于文库用户免费上传的可与卜离。共享的文档，具体共享方式法用于分离在测定条件下呈离解状态的组分，如具有酸性或碱性的化合定。只要带有以下“共享法在药物分析中的应用非常广泛，例如生物碱、磺胺类药物、某些抗生当便是该类了解这档类型F均可采用此方法。

四、空间排斥色谱法
空间排斥色谱也称为凝胶色谱其固定相是具有一定孔径范围的多孔性物质,即凝胶。被分离组分因分子空间尺寸大小的不同而被分离。当组分被流动相携带进入色谱柱时，体积大的分子不能进入固定相表面的孔穴中，而随流动相直接通过色谱柱，保留时间最短。体积较小的分子可以进入孔穴内，在色谱柱中所走的途径较长，保留时间也较长。分子的尺寸越小，可进入的孔穴越多，所走的路径越长，保留时间也越长。因此，凝胶色谱中，在一定范.围内，体积不同的分子保留时间不同，从而达到分离的目的。凝胶色谱法主要用来分离高分子化合物，如蛋白质、多糖等。由于分子里和分子体积有关，凝胶色谱还可以用来测定组分的分子里。

五、亲和色谱法
亲和色谱法是利用或模拟生物分子之间的专-性作用，从生物样品中分离和分析一些特殊物质的色谱方法。生物分子之间的专一作用包括抗原与抗体，酶与抑制剂，激素和药物.与细胞受体，维生素与结合蛋白，基因与核酸之间的特异亲和作用等。亲和色谱的固定相是将配基连接于适宜的载体上而制成的，利用样品中各种物质与配基亲和力的不同而达到分离。当样品溶液通过色谱柱时，待分离物质X与配基L形成X-L复合物，而被结合在固定相上，其他物质由于与配基无亲和力而直接流出色谱柱，用适宜的流动相将结合的待分离物质洗脱，如采用一定浓度的醋酸或氨溶液为流动相，减小待分离物质与配基的亲和力，使复合物离解，从而将被纯化的物质洗脱下来。HPAC可用于生物活性物质的分离、纯化和测定，还可以用来研究生物体内分子间的
相互作用及其机理等。

六、手性色谱法
不少有机药物的结构中有不对称碳原子，又称手性碳原子，有手性碳原子的药物具有旋光性。立体构型不同的一对对映体，其药效、毒副作用往往不相同。例如抗高血压药物a -甲基多巴是S-(-)体;又如氯霉素(含有二个手性碳原子)，只有D-(-)异构体有效。而L-(+)异构体完全无效。沙利度胺(反应停)的两个对映体对小鼠镇静作用的效价相近，但只有左旋异构体才有胚胎毒及致畸作用。因此，对映体的分离，在药物的制备和质量控制方面，都具有重要的意义。对映体在普通条件下的理化性质是相同的，因此分离对映体需要在手性条件下进行。分离对映体的色谱方法称为手性色谱法。手性色谱法分为间接法和直接法两种。间接法是将对映体与--定的手性衍生化试剂反应，使其由对映体转变为非对映体，再利用他们理化性质的差异，用-般的色谱条件进行分离。直接法不需作衍生化反应，直接利用手性色谱柱或手性流动相进行分离，应用较多。