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离子淌度谱( Ion mobility spectrometry,IMS )是一种强大的分析技术,在过去五十年中已得到广泛应用,主要应用于化学物理和分析化学应用。直到最近才探索了 IMS 与 MS( IMS-MS )联用的潜力,用于肽段和蛋白质的分离、鉴定和定量。
timsTOF 系列质谱仪
通过将 TIMS 分析器整合到四极杆飞行时间( QTOF )质谱仪的前端,离子可在释放用于 MS 分析之前在一段特定时间内进行累积。多肽离子在 TIMS 中进行淌度分离和释放( ~ 100 ms ),然后在检测器中进行检测,产生 TIMS 的 MS 热图;经 TIMS 分离的多肽离子进入四极杆中进行隔离并选择母离子,母离子选择过程是在离子释放的过程中同步进行。zui后母离子和碎片离子根据淌度值进行对齐。
TIMS
捕集离子淌度谱( TIMS )是气相中的 IMS 分离技术,除了 HPLC 分离和质谱分析,它通过增加分离维度来应对复杂样品,提高了峰容量和化合物表征的信息。同样重要的是,TIMS 分析器还用于积累和富集给定质量和淌度值的离子,从而在灵敏度和速度上得到独特提高,同时增加分离的维度。
独特的前端TIMS分析仪针对更高速度的霰弹蛋白质组学进行了优化,能从较小样品量中获得突出识别性能。其独特的双TIMS几何形状允许在第一个TIMS部分中并行累积,并且在实时执行额外的TIMS分离步骤之后,离子从第二个TIMS部分释放出来,用于MS / MS碎裂。这致使近乎100%的占空比,使这种平行堆积和连续碎裂(PASEF)技术在酶促消化的蛋白质混合物的可重复纳流LC-MS分析中具有前所未有的性能。
使用双 TIMS 技术,现在可使高灵敏度、高速的 shotgun 蛋白质组学实现近 100% 的离子利用率。新颖的设计允许离子在前段积累,而后段的离子根据离子淌度值顺序释放。此过程称为 PASEF®( Parallel Accumulation Serial Fragmentation,平行累积连续碎裂 )技术。
PASEF®
在速度方面,布鲁克专家重新设计了 MS/MS 技术,以满足 shotgun 蛋白质组学的要求。借助 PASEF® 技术,可以实现 > 100 Hz 的测序速度;低丰度的多肽通过多次选择并碎裂,其 MS/MS 谱图质量显著提高。
用于PASEF质谱法的 timsTOF Pro系统,其使用专有的捕获离子迁移谱(TIMS)技术,实现了出色的单次肽和蛋白质鉴定性能,具有更高速、更高灵敏度和强大的高通量蛋白质组学分析能力。
PASEF能力代表了性能的改进,因为它提供更高灵敏度和更高速度的霰弹蛋白质组学,而不损失质量分辨率。PASEF消除了这些临界限制,对于高灵敏度的近100%的占空比,同时保持两个前体的超高质量分辨率和产物离子。利用双TIMS技术的这一重要PASEF功能为科学家们提供了深入研究复杂生物学和发现低水平生物学重要蛋白质的潜力的工具,或临床蛋白质组学研究中进行纵向研究。
布鲁克timsTOF Pro质谱也有利于定量蛋白质组学工作流程,因为这种创新的TIMS-powered的四极杆飞行时间质谱仪(QTOF-MS)由MaxQuant/Perseus和PEAKS Studio蛋白质组学分析软件支持。
定量蛋白质组学是蛋白质组学研究的一个关键领域,双TIMS-powered的PASEF提供的固有优势超过门控、串联时间和基于FT的MS分析仪局限性。新的timsTOF Pro提供超过四个数量级的具有低肽负载(100-200ng)的动态肽,使其适用于小细胞群体的蛋白质组学和生物临床研究中经常遇到的低样本量。
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