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Orbitrap Fusion三合一不同扫描方式的对比
发表时间:2023/11/13 14:38:00  |  点击率:729

具有灵活多样的扫描组合方式是Orbitrap Fusion的优势之一,包括可以使用CIDHCDETDDDDT等不同的裂解模式,可以使用Orbitrap或离子阱扫描检测,可任意选择破裂和检测模式进行MS分析,可同时选择多个二级离子进行三级定量分析(SPS技术)等。

通过考察蛋白质组学最常用的扫描方式:OT-HCD-ITOT-CID-ITOT-HCD-OTOT-CID-OT。使用这四种扫描方式对酵母全蛋白进行60分钟有效梯度的数据采集,并对鉴定结果进行分析、比较。

比较了四种扫描方式在蛋白鉴定数量、肽段鉴定数量、PSM数量、谱图数、谱图鉴定率五方面的差异,并以OT-HCD-IT结果作为100%进行归一化。

结果表明,OT-HCD-IT由于速度zui快,因此获得的谱图数和鉴定数zui多;OT-CID-IT相比前者扫描速度略慢5%,因此获得的结果略少,谱图数和蛋白鉴定数约是前者的95%OT-HCD-OTQ-Exactive质谱的扫描方式相同,由于无法实现一级二级的同时运行,谱图数和蛋白鉴定数分别是OT-HCD-IT70%85%OT-CID-OT速度zui慢,谱图数和蛋白鉴定数分别是OT-HCD-IT60%75%。此外,四种扫扫描方式鉴定率相差不大,表明数据质量没有明显差异。

HCD相比,CID虽然速度略慢且有三分之一效应,但灵敏度更高,更适合于低丰度蛋白和少量样本分析。二级Orbitrap检测常用于定量蛋白质组学研究,TMT/iTRAQ标记定量、PRM定量都要用到二级分辨率、高质量精度。四种扫描方式有着各自的特点,适用于不同的应用方向,所以根据实验目的不同选择合适的扫描方式非常重要。

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