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怎么看懂液相色谱二维图谱?
发表时间:2021/3/16 12:03:02  |  点击率:13027

色谱图其实简单地讲是一个横坐标是时间纵坐标是电信号的二维图谱。    

高效液相色谱法,你可以简单地想象,固定相是一个多空海绵状的柱形结构,样品在孔洞中进进出出。因为各个物质的吸附能力不同,所以才会在色谱图中拉开距离。

 

                              


实验相关的参数:

1、保留时间:也就是可以定性的数据参数

如果使用同样的色谱柱,同样的流动相,分析同样的样品,那么这个样品的保留时间,应该是固定的。不同保留时间的色谱峰,应该表现出的是不同的物质。如果你跑的是反相色谱,那么色谱峰越靠后,它对应物质的极性也就越小。

2、峰面积:也就是可以定量的数据参数

一旦分离,这些成分就被转换成电离状态。MS使用质荷比作为鉴别组分的特征因子,因此下一步涉及在此基础上分离组分。质荷比对特定分子比HPLC中的保留时间更特异,这就是为什么使用MS。质量电荷差异分析仪,就像HPLC中的分离技术一样,可以有所不同,包括四极杆、飞行时间和离子阱等分析仪。然后由检测器对出现的离子进行计数。产生的MS光谱显示了质荷比与峰值强度的关系。

色谱图显示组分作为保留时间和质荷比与质量相对丰度的函数,这意味着全LC-MS的总输出是一个具有两个水平轴的图表。图表的焦点可以根据研究人员的目标而改变。

峰值检测在滤波之后进行,其中峰值表示成分或成分的断裂。峰可以根据它们覆盖的高度或面积来选择。通过将存在的峰与已知的峰进行匹配,可以通过眼睛识别某些峰模式。这可以帮助确定存在什么分子,或者分子中存在多少原子。

在色谱图中可以读出来的参数,在同一个色谱条件下,同一个物质的浓度和峰面积是成正比的。也就是说,如果你配制1.0mg/ml的X物质,进样后峰面积是10000,那么,你配制0.5mg/ml的X物质,进样后峰面积差不多就是5000

3、波长:这个是可以顺利进行试验的前提条件

同一样品,同一方法,同一色谱柱,在不同波长的峰面积是不同的。一个物质指在某些特殊波长下有吸收。比如一个物质在210nm和254nm处有吸收。那么波长在280nm处可能无法检出该物质。所以一个实验方法开始时要进行波长扫描。

频谱滤波旨在去除数据中的噪声,从而便于检测感兴趣的峰值。在LC - MS过程中,除了其他方法之外,还可以通过使用具有较小粒径的较短柱来优化降噪。

分析物的色谱图不变,因此它通常可用作分子类型的指纹。

这通常通过观察保留时间和质荷比的峰值在哪里来实现。目前,色谱图的大多数分析都是通过计算完成的。这意味着软件会将生成的色谱图与已知的色谱图进行比较,以识别成分,或者将其存储为新发现的色谱图。

 

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