二手液相二手高效液相色谱法的固定相、流动相的要求和特点

二手液相二手高效液相色谱法 的固定相要求

要求：颗粒细且均匀、传质快、机械强度高、耐高压，化学稳定性好

液固：全多空硅胶、高庚子多空微球

二手液相二手高效液相色谱法 的流动相要求

要求：化学稳定性好；适宜溶解度；与检测器相适应；纯度高；粘度低。

使用前经微孔滤膜过滤，除去固体颗粒，还要脱气处理。
         

二手液相二手高效液相色谱法 的固定相

常用化学键和相的种类
非极性键合相：十八烷基硅烷（ODS）最常用。一般用于反相色谱。长链k大，载样量高，稳定性好。短链分离速度快，色谱峰对称性好，苯基键合与短链相似。
弱极性键合相：醚基和二羟基键合相，应用较少。
极性键合相：氨基、氰基，一般用于正相色谱。氰基分离选择性类似于硅胶，对双键有选择性，对双键异构体，或含双键数不同的环状化合物有较好分离能力。一些硅胶上不能分离的极性强的化合物也可在氰基上分离。氨基键合相与酸性硅胶有不同性能，氨基可与糖分子羟基选择性作用，从而分离糖。在酸性介质中还是弱阴离子交换剂，能分离核苷酸。与羰基反应。   键合相的性质和特点
键合反应：主要是硅氧烷型键合相，以氯硅烷与硅胶进行硅烷化反应而制的。
含碳量和覆盖度：键合相表面基团的键合量可以对键合硅胶进行元素分析，用含碳的百分数表示。覆盖度参加反应的硅醇基数目占硅胶表面硅醇基总数的比例。在键合反应后用三甲基氯硅烷进行钝化处理，即封尾，减少对极性组分的吸附。
键合相特点：化学稳定性好，寿命长；均一性和重现性好；柱效高，选择性好；适于梯度洗脱；载样量大。   其他种类固定相

键合型离子交换剂：常用阳离子型键合相是强苏醒磺酸类；常用阴离子型键合相是季铵盐类；还有弱酸（碱）型离子交换剂。
手性固定相（CSP）：蛋白类、多糖类、环糊精、π-氢键型（刷型）、大环抗生素类、配体交换、其他。载样量小，稳定性差且价格昂贵。
亲和色谱固定相：配基和载体间有一适当长度间隔臂。

二手液相二手高效液相色谱法 的流动相

流动相对分离的影响

分离方程式：R=\frac{\sqrt{n}}{4}\cdot\frac{\alpha-1}{\alpha}\cdot\frac{k_2}{1+k_2}

选择合适的溶剂强度使组分k在最佳范围内，选择合适种类的溶剂改善选择性使α增大获得良好分离度R>1.5

溶剂极性和强度

在化学键和色谱中溶剂洗脱能力即溶剂强度直接与它的极性相关。

溶剂极性用溶剂极性参数表示P^\prime，用以表示正相色谱中洗脱能力

反相键合相色谱溶剂强度用另一强度因子S表示

混合溶剂可以用P或S的加权平均表示