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如何安装和使用安捷伦液相色谱柱?
发表时间:2018/7/18 14:29:02  |  点击率:13487

液相色谱仪由高压液体泵、检测器及液相色谱柱等三部分组成,其中安捷伦液相色谱柱的正确安装和使用,是液相色谱工作的关键.

安捷伦液相色谱柱的结构:

   柱接头采用低死体积结构,柱接头是两端螺纹组件,一端是为7/16英寸外螺纹,另一端是3/16英寸的内螺纹。7/16英寸外螺纹与1/4英寸柱管(Φ6.35mm)连接,中间放置压坏用于密封。3/16英寸的内螺纹与1/16英寸(Φ1.57mm)的连接管连接,中间也放置压环用于柱接头的密封。为了尽量减少柱外死体积,在安装色谱柱时,用Φ1.57mm连接管通过空心螺钉压环后要尽量插到底,然后再拧紧空心螺钉。压环被空心螺钉挤压变形后紧箍在连接管上.

    在两端柱接头内,柱管两端各放置一片不锈钢滤片或滤网,用于封堵柱填料不被流动相冲出柱外而流失。空柱各组件均为316#不锈钢材质,能耐受一般的溶剂作用。但由于含氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性,故使用时要注意,柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂,以避免腐蚀。

安捷伦液相色谱柱的安装: 

按柱管上标示的流动相流向,将色谱柱的入口端通过连接管与进样阀出口相连接,柱的出口与检测器连接。连接管是外径为1.57mm、内径为0.1-0.3mm的不锈钢管,连接管的两端均有空心螺钉及密封用压环,在接管时一定要设法降低柱外死体积,连接管通过空心螺钉、压环后尽量用力插到底,然后顺时针拧紧空心螺钉,直到拧不动为止,再用扳手继续顺时针拧1/4-1/2圈,切记不要用力过大,如色谱柱通过流动相加压后有漏液现象,请用扳手继续顺时针拧1/4圈,直至不漏液为止。

 

安捷伦液相色谱柱的使用:

色谱柱在使用前,最好进行柱的性能测试,并将结果保存起来,作为今后评价柱性能变化的参考。但要注意:柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同;另外,在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行,只有这样,测得的结果才有可比性。

  1. 样品的前处理:最好使用流动相溶解样品;使用予处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质;使用0.45μm的过滤膜过滤除去微粒杂质。
  2. 流动相的配制:液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的,因此要求流动相具备以下的特点:流动相对样品具有一定的溶解能力,保证样品组分不会沉淀在柱中;流动相具有一定惰性,与样品不产生化学反应(特殊情况除外);流动相的黏度要尽量小,以便在使用较长的分析柱时能得到好的分离效果;同时降低柱压降,延长液体泵的使用寿命;流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器,最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制;流动相沸点不要太低,否则容易产生气泡,导致实验无法进行;在流动相配制好后,一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测,还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
  3. 流动相流速的选择:因柱效是柱中流动相线性流速的函数,使用不同的流速可得到不同的柱效。对于一根特定的色谱柱,要追求最佳柱效,最好使用最佳流速。对内径为4.6mm的色谱柱,流速一般选择1ml/min,对于内径为4.0mm柱,流速0.8ml/min为佳。当选用最佳流速时,分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间。
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